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1. 預(yù)期用途

該面板包括八個(gè)單獨(dú)編碼的安瓿，每個(gè)安瓿都含有從人類細(xì)胞系中提取的冷凍干燥、純化的基因組 DNA (gDNA)。該面板包括七種材料，每種材料具有不同的 KRAS 密碼子 12 或 13 基因型、共有突變百分比和共有突變體以及每個(gè)二倍體人類基因組質(zhì)量的總 KRAS 拷貝數(shù)。此外，該組包含七個(gè) KRAS 密碼子 12 和 13 基因型中的每一個(gè)的 gDNA 純合野生型材料（材料代碼 16/266）。攜帶感興趣的 KRAS 突變的材料可以通過(guò)應(yīng)用特定于每種材料的計(jì)算來(lái)稀釋，以產(chǎn)生一系列 KRAS 共有突變百分比的標(biāo)準(zhǔn)。該面板旨在用作校準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、試劑盒和測(cè)定的主要標(biāo)準(zhǔn)。這些材料不用作運(yùn)行控制。

這些材料由外部實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，并顯示適合作為下一代測(cè)序 (NGS)、Sanger 測(cè)序、實(shí)時(shí) PCR、焦磷酸測(cè)序、數(shù)字 PCR (dPCR)、基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間 (MALDI- TOF) 質(zhì)譜分析 (MassARRAY?)、KRAS StripAssay?、高分辨率熔解分析 (HRM)、擴(kuò)增難治突變系統(tǒng) PCR (ARMS-PCR)、PCR-反向序列特異性寡核苷酸探針技術(shù) (PCR-rSSO)、微測(cè)序和限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）。

該小組由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)于 2017 年成立，作為 WHO 第一個(gè)基因組 KRAS 密碼子 12 和 13 突變國(guó)際參考小組，NIBSC 代碼 16/2501

.這些材料不得用于任何其他用途。數(shù)據(jù)分析必須專注于 KRAS。不得嘗試識(shí)別源材料捐助者。

NIBSC 16/250 基因組KRAS密碼子12,13突變（標(biāo)準(zhǔn)品）

2. 注意

該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動(dòng)物

對(duì)用于制備該組的細(xì)胞系進(jìn)行了測(cè)試，通過(guò) PCR 發(fā)現(xiàn) HIV1、HTLV1、HBV 和 HCV 呈陰性。在小組的制備中使用了一種 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉(zhuǎn)化的類淋巴母細(xì)胞系。 EBV 是英國(guó)危險(xiǎn)病原體咨詢委員會(huì)分類的第 2 類病原體。 EBV 序列可能存在于這些材料中，但 DNA 是使用蛋白質(zhì)變性和去除的方案制備的，因此可能使病毒失活。

但是，不能消除活病毒存活的可能性。與所有生物來(lái)源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對(duì)健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開(kāi)安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

該小組在一項(xiàng)涉及 56 個(gè)實(shí)驗(yàn)室和 68 種測(cè)試方法的國(guó)際合作研究中進(jìn)行了測(cè)試。基因型和共識(shí)

八種材料中每種材料的突變百分比均來(lái)自最一致的方法 NGS 和 dPCR（表 1）。最終用戶能夠使用基于突變體和總的稀釋公式進(jìn)一步稀釋突變體材料（使用野生型 KRAS 密碼子 12 和 13 材料 16/266，或另一種校準(zhǔn)到材料 16/266 的野生型基因組 DNA） KRAS 拷貝數(shù)，為了在可以實(shí)現(xiàn)測(cè)定校準(zhǔn)的較低共有突變百分比范圍內(nèi)達(dá)到進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)，請(qǐng)參見(jiàn)下面的第 7 節(jié)

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國(guó)：英國(guó)。

該組包含八個(gè)單獨(dú)編碼的安瓿，每個(gè)安瓿含有大約 5 μg 從人類細(xì)胞系中提取的凍干純化基因組 DNA（材料 16/266 為 25 μg）。使用“鹽析”方法提取基因組 DNA，并在冷凍干燥前用 5mg/ml 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。

5. 存儲(chǔ)

將所有未開(kāi)封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下。

請(qǐng)注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，

NIBSC 可以在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。

NIBSC 16/250 基因組KRAS密碼子12,13突變（標(biāo)準(zhǔn)品）

6. 開(kāi)瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個(gè)“易開(kāi)”顏色的壓力點(diǎn)，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機(jī)可商購(gòu)獲得。要打開(kāi)安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說(shuō)明進(jìn)行操作。

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量?jī)龈刹牧系娜魏尾糠?/p>

a。如上文第 6 節(jié)所述打開(kāi)安瓿瓶。

b。在室溫下用 100μl 無(wú)核酸酶水復(fù)溶凍干材料，除了材料 16/266（野生型 KRAS）應(yīng)用 200μl 無(wú)核酸酶水復(fù)溶。

C。使用移液器將每個(gè)樣品轉(zhuǎn)移到無(wú)核酸酶管中，確保收集最大可用體積。

d。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時(shí)，然后用移液管充分混合。

e.用 300μl 分子生物學(xué)級(jí) 1x Tris-EDTA 緩沖液（10mM Tris，1mM EDTA）進(jìn)一步稀釋僅材料 16/266（野生型 KRAS），并用移液管充分混合，使該材料的總體積為 500μl。

F。在 1x Tris-EDTA 緩沖液中，所有樣本的 DNA 濃度現(xiàn)在約為 50ng/μl。使用前確認(rèn) DNA 濃度。不必?fù)?dān)心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點(diǎn)。

G。突變型 KRAS 材料可以與材料 16/266（野生型 KRAS）結(jié)合以產(chǎn)生任何選定突變百分比的標(biāo)準(zhǔn)品；請(qǐng)參閱附錄 I 中的詳細(xì)信息。

H。將所需的量添加到您的檢測(cè)中。材料可以進(jìn)一步稀釋（用無(wú)核酸酶水或合適的緩沖液），以達(dá)到適合您分析的 DNA 濃度。

g。應(yīng)在同一測(cè)定中分析初級(jí)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，以將值分配給二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。